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Designação do projeto | NAM4toxins – Seleção de novo de aptâmeros específicos para
toxinas alimentares com recurso a mímicos de ácidos nucleicos. Código do projeto|POCI-01-0145-FEDER-028659 Objetivo principal |Atualmente, a deteção de toxinas de origem alimentar
baseia-se em técnicas analíticas complexas e demoradas, ou em testes
imunológicos, com limitações associadas ao desempenho dos anticorpos. Aptâmeros são sequências de ácidos nucleicos de cadeia
simples que possuem características únicas de ligação às moléculas-alvo. A sua seleção
é, tipicamente, limitada a ácidos nucleicos naturais (DNA ou RNA), restringindo
a 4 nucleótidos o número de combinações possíveis para cada posição. A
utilização de mímicos de ácido nucleico (NAMs), moléculas sintéticas com
variadas estruturas capazes de hibridar com sequências complementares de
DNA/RNA, permite aumentar as possíveis combinações, aumentando exponencialmente
o número de potenciais aptâmeros. O principal objetivo deste projeto é aplicar
uma nova metodologia de seleção de aptâmeros, baseada na síntese de novo
de uma biblioteca de sequências compostas por NAMs e num único passo selecionar
aptâmeros específicos para toxinas alimentares. Esta abordagem permitirá criar
uma plataforma para o desenvolvimento de novos aptâmeros que combina a
capacidade de reconhecimento destes com a diversidade dos NAMs. Como caso de
estudo, este projeto incidirá sobre as enterotoxinas de Staphylococcus (SE),
mas pode ser facilmente adaptado a outras toxinas. Região de intervenção | O presente projeto enquadra-se nos domínios prioritários de
especialização inteligente (EREI) da região Norte. Mais concretamente, são
abarcadas 3 Áreas de Atuação da EREI Norte: Sistemas Agroambientais e
Alimentação, Ciências da Vida e Saúde e Sistemas Avançados de Produção. Entidade beneficiária | Instituto Nacional de Investigação Agrária e Veterinária, I.P. (INIAV, I.P.); Universidade do Porto Data da aprovação | 2018-04-24 Data de início | 2016- 04-26 Data de conclusão | 2021-07-25 Custo total elegível | 239.834,15€; Custo elegível INIAV| 184.859,15€ Apoio financeiro total da União Europeia Objetivos, atividades e resultados esperados O plano de trabalhos proposto prevê a execução de 4 atividades
de caracter científico que se articulam entre duas entidades: INIAV e FEUP. Atividade 1 – Seleção in vitro de NAM-aptâmeros. Será gerada uma pool de aptâmeros que incorporem NAM
e estes serão sujeitos a um processo de seleção e purificação sequencial. No
final, os aptâmeros mais promissores serão selecionados para a tarefa seguinte. Atividade 2 – Comparação de aptâmeros modificados (NAM) e
não modificados (DNA). Os aptâmeros obtidos na atividade 1 serão caracterizados tendo
em conta estabilidade, afinidade e seletividade. Estes dados serão comparados
com as propriedades de aptâmeros de DNA. Serão desenvolvidos modelos que
facilitem a comparação das características de aptâmeros de NAM e DNA. Atividade 3 – Desenvolvimento de um ensaio portátil tipo em
aptâmeros. Com base na caracterização da atividade 2, os aptâmeros mais
promissores serão incorporados num teste portátil. O ensaio será avaliado tendo
em conta a especificidade e limite de deteção. No final desta atividade, o
teste portátil estará pronto para validação com amostras alimentares. Atividade 4 – Validação do ensaio portátil em matrizes
alimentares. O ensaio portátil será validado utilizando amostras de
alimentos. Os resultados obtidos serão comparados com as técnicas padrão.
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